Súluskiljun er tækni sem notuð er til að aðskilja og hreinsa efnasambönd út frá pólun þeirra og samspili við kyrrstæða og hreyfanlega fasa. Hér er skref fyrir skref leiðbeiningar um undirbúning og framkvæmd súluskiljunar:
Efni sem þarf:
Súla: Gler- eða plastsúla með krana.
Stöðugur fasi: Kísilgel eða súrál (aðsogsefni).
Hreyfanlegur fasi: Leysir eða leysiefnablanda (skolunarefni).
Sýnishorn: Blandan sem á að aðskilja.
Pökkunarefni (valfrjálst): Bómull eða glerull.
Bikarglas eða söfnunarhettuglös: Til að safna eluent hlutum.
Búnaður: Klemma og standur, pípetta, trekt, spaða.
Skref til að undirbúa dálkaskiljun:
Veldu aðsogsefnið:
Veldu kísilgel eða súrál eftir pólun efnasambandanna sem á að aðskilja.
Kornastærð aðsogsefnisins (40–63 µm) hefur áhrif á skilvirkni skilvirkni.
Undirbúa dálkinn:
Stingdu botninn á súlunni með bómull eða glerull til að koma í veg fyrir að aðsogsefni leki.
Klemdu súluna lóðrétt á stand með lokuðum krana.
Blaut pökkun (valið til að ná sem bestum árangri):
Bætið litlu magni af leysi (hreyfanlegum fasa) í súluna.
Útbúið grugglausn af aðsogsefninu í leysinum (notið 1.5-2 sinnum rúmmál aðsogsefnisins í súlunni).
Hellið slurry varlega í súluna með trekt.
Leyfðu aðsogsefninu að setjast með því að slá varlega á súluna eða láta hana hvíla.
Opnaðu kranann stuttlega til að tæma umfram leysi þar til aðsogsefnið myndar þétt og jafnt rúm.
Þurrpökkun (val aðferð):
Bætið þurra aðsogsefninu beint í súluna.
Bankaðu varlega á súluna til að tryggja jafna pökkun.
Bætið leysinum varlega meðfram súluveggjunum til að trufla ekki pakkað aðsogsefnið.
Skilyrði dálksins:
Þegar búið er að pakka í hana skal forskola súlunni með leysi til að fjarlægja loftpoka og koma aðsogsefninu í jafnvægi.
Hladdu sýninu:
Leysið upp sýnið í litlu magni af farsímafasanum.
Berið sýnið varlega ofan á pakkað aðsogsefnið með því að nota pípettu eða sprautu.
Leyfðu sýninu að aðsogast inn í kyrrstæða fasann.
Bættu við farsímafasanum:
Bætið leysi varlega við efst á súlunni án þess að trufla aðsogsrúmið.
Opnaðu kranann til að hefja skolun og haltu stöðugu flæðihraða.
Safna brotum:
Safnaðu skolaða leysinum í röð hluta með því að nota tilraunaglas eða hettuglös.
Fylgstu með brotunum með UV-ljósi, TLC (þunnlagsskiljun) eða öðrum greiningaraðferðum.
Fínstilltu leysikerfið:
Byrjaðu á einum leysi eða lágskauta leysi.
Auka skautunina smám saman ef efnasambönd skolast ekki út.
Ráð til að ná árangri:
Forðastu loftbólur: Gakktu úr skugga um að aðsogsrúmið sé pakkað þétt og jafnt.
Viðhalda flæði: Stöðugt og hóflegt flæði gefur betri aðskilnað.
Gradient Elution: Notaðu blöndu af leysiefnum með smám saman vaxandi pólun til að fá betri upplausn.
Fylgstu með framvindu: Notaðu TLC til að athuga aðskilnaðinn og bera kennsl á brot.
Með því að fylgja þessum skrefum geturðu í raun aðskilið og hreinsað efnasamböndin þín með því að nota súluskiljun.